免疫組化是一種運用免疫學原理進行的一種抗原抗體反應(yīng)。那免疫組化的具有原理是什么呢?免疫組化的作用又有哪些呢?今天小編就來為大家一一介紹一下。想知道的朋友不妨就來看一下吧。

　　免疫組化原理

　　相信大家都知道，一種技術(shù)都尤其原理的，不是嗎?那免疫組化的原理是什么呢?

　　根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原先和一抗結(jié)合，再利用一抗與標記生物素、熒光素等的二抗進行反應(yīng)，前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素等)結(jié)合，后通過呈色反應(yīng)或熒光來顯示細胞或組織中化學成分，在光學顯微鏡或熒光顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物，從而能夠在細胞爬片或組織切片上原位確定某些化學成分的分布和含量。

　　免疫組化分類

　　1.免疫熒光細胞化學技術(shù)

　　將已知抗體標上熒光素,以此作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當抗原抗體復合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會發(fā)出一定波長的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量。

　　2.免疫酶細胞化學技術(shù)

　　是目前免疫組織化學研究中常用的技術(shù).基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進行定位或定性研究。

　　3.免疫膠體金技術(shù)

　　就是用膠體金標記一抗，二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針對組織或細胞內(nèi)的抗原進行定性，定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高，多用于免疫電鏡的單標記或多標記的定位研究。

　　免疫組化作用

　　以上我們也是知道免疫組化的原理以及分類了，那免疫組化有什么作用呢?下面我們就一起來看一下。

　　標本

　　實驗所用主要為組織標本和細胞標本兩大類，前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片，后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。

　　其中石蠟切片是制作組織標本常用、基本的方法，對于組織形態(tài)保存好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔，供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響，但可進行抗原修復，是免疫組化中首選的組織標本制作方法。

　　抗體

　　免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體，單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體，應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后，從動物血中所獲得的免疫血清，是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

　　常用染色方法

　　根據(jù)標記物的不同分為免疫熒光法，免疫酶標法，親和組織化學法，后者是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)的檢測方法。這種方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位，其中生物素—抗生物素染色法常用。

　　免疫組化操作步驟

　　免疫組化的操作步驟有哪些呢?相信很多人都是不知道的，既然不知道，那下面我們就一起來看一下吧。

　　1.切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復，可在此步后進行。

　　2.緩沖液洗3min/2次。

　　3.為了降低內(nèi)源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色，將切片放在HydrogenPeroxideBlock中孵育10-15分鐘。