一、醋酸白試驗(yàn)

　　用3-5%醋酸外涂疣體2-5分鐘，病灶部位變白稍隆起，肛門病損可能需要15分鐘。本試驗(yàn)的原理是蛋白質(zhì)與酸凝固變白的結(jié)果，HPV感染細(xì)胞產(chǎn)生的角蛋白與正常的未感染上皮細(xì)胞產(chǎn)生的不同，只有前者才能被醋酸脫色。醋酸白試驗(yàn)檢測HPV的敏感性很高，它比常規(guī)檢測觀察組織學(xué)變化還好。但偶爾在上皮增厚或外傷擦破病例中出現(xiàn)假陽性、假陽性變白跡象顯得界限不清和不規(guī)則。美國CDC提示，醋酸白試驗(yàn)并不是特異試驗(yàn)，且假陽性較常見。

　　二、免疫組織學(xué)檢查

　　常用過氧化物酶抗過氧化物酶方法(即PAP)，顯示濕疣內(nèi)的病毒蛋白，以證明疣損害中有病毒抗原。HPV蛋白陽性時(shí)，尖銳濕疣的淺表上皮細(xì)胞內(nèi)可出現(xiàn)淡紅色的弱陽性反應(yīng)。

　　三、組織化學(xué)檢查

　　取少量病損組織制成涂片，用特異抗人類乳頭瘤病毒的抗體作染色。如病損中有病毒抗原，則抗原抗體結(jié)合。在過氧化物酶抗過氧化物酶(PAP)方法中，核可被染成紅色。此法特異性強(qiáng)且較迅速，對診斷有幫助。

　　四、病理檢查

　　主要為角化不全，棘層高度肥厚，乳頭瘤樣增生，表皮突增厚，延長，其增生程度可似假性上皮瘤樣。刺細(xì)胞和基底細(xì)胞并有相當(dāng)數(shù)量的核分裂、頗似癌變。但細(xì)胞排列規(guī)則，且增生上皮和真皮之間界限清楚。其特點(diǎn)為粒層和刺層上部細(xì)胞有明顯的空泡形成。此種空泡細(xì)胞較正常大，胞漿著色淡、中央有大而圓，深嗜堿性的核。通常真皮水腫、毛細(xì)血管擴(kuò)張以及周圍較致密的慢性炎性浸潤。Bushke-loewenstein巨大型尖銳濕疣，表皮極度向下生長，代替了其下面的組織、易與鱗狀細(xì)胞相混，故須多次活檢。若有緩慢發(fā)展之傾向， 則為一種低度惡變的過程，即所謂疣狀癌。

　　五、基因診斷

　　迄今，HPV難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學(xué)技術(shù)檢測，主要實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)是核酸雜交。近年來發(fā)展的PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，為HPV檢測開辟了新途徑。

　　(一)標(biāo)本的采集及處理

　　1.標(biāo)本的采集和預(yù)處理

　　用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細(xì)胞。在作細(xì)胞學(xué)檢查的同時(shí)，將標(biāo)本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS離心(3000g，10min)洗滌2次，沉積細(xì)胞重懸于1mlPBS中，取0.5ml細(xì)胞懸液抽提DNA。

　　2.標(biāo)本核酸的提取

　　按1體積細(xì)胞懸液加10倍體積的細(xì)胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(1:1)，氯仿/異戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10體積3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍體積無水乙醇置-20℃ 2h或過夜沉淀DNA;加1體積乙醇洗滌1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃溫育30min。

　　(二)PCR擴(kuò)增

　　引物設(shè)計(jì)和合成

　　HPV基因組可分為早期區(qū)(E)和晚期區(qū)(L)，每區(qū)含一系列開放讀碼框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非編碼區(qū)及E1、E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。Manos等從HPVL1區(qū)中選擇保守序列設(shè)計(jì)合成引物MY11和MY09見表1，該引物與HPV 6、11、16、18及33型有互補(bǔ)序列，也可擴(kuò)增其它型HPV。