用于立克次體病診斷的方法雖有多種，但最常用者仍為外斐試驗。宜取雙份或三份血清標本(初入院、第2周和恢復期)滴定效價在1∶160以上者為陽性，有4倍以上增長者則更具診斷意義。次常用者為補結試驗和微量凝集試驗，其它如IFA、ELISA、固相放射免疫測定(SPRIA)、乳膠凝集試驗、間接血凝試驗、免疫電鏡等也有助于診斷，但臨床上應用較少或僅供研究、流行病學調查等之用。
病原體的分離可采用雞胚培養、組織培養，或豚鼠、小鼠、大鼠等動物接種。戰壕熱的病原體可在以血瓊脂為基礎的培養基上生長，除戰壕熱病原體和其它巴通體之外，其它人類立克次體病病原體的初代分離均采用豚鼠或(和)小鼠接種。由于病人血中立克次體很少，接種和組織培養等方法往往失敗，且易導致實驗室傳播，不宜推廣。
早期有效的治療可使抗體產生延遲1周左右，因而必須在發病后4～6周重復血清學檢查1次。