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實驗室診斷

  RIA或者ELISA

  即:放射免疫診斷(RIA)或酶聯(lián)免疫試驗(ELISA)檢測血清中抗HCV

  丙肝病毒模式圖1989年,Kuo等建立了抗-C-100放射免疫試驗方法(RIA),隨后 Ortho公司又研制成功酶聯(lián)免疫試驗方法(ELISA)檢測抗-C-100。這兩種方法均用重組酵母表達的病毒抗原(C-100-3,為NS4編碼的蛋白,含363個氨基酸),經(jīng)純化后包被微量塑料板孔,然后加被檢血清,該病毒抗原即與被檢血清中抗-C-100結(jié)合,最后加同位素或酶標記的鼠抗人lgG單克隆抗體,加底物顯色判斷結(jié)果。

  用上述酶聯(lián)免疫試驗法(ELISA)檢測抗-C-100有如下缺點:

  1. 抗-C-100出現(xiàn)較晚,約半數(shù)輸血后丙型肝炎病人于輸血后4~6個月抗-C-100首次陽轉(zhuǎn),因此,不宜作為急性丙型肝炎的常規(guī)實驗室診斷;

  2.抗-C-100不是中和抗體,也不是lgM抗體,而是lgG 抗體;

  3.本法不夠靈敏,少數(shù)丙型肝炎病人檢測不到抗-C-100;  4.有非特異性,一些自家免疫性慢性肝病患者可出現(xiàn)假陽性,因此,抗HCV陽性需作重組免疫印跡試驗(Recombinant Immune Blot Assay, RIBA, 或稱 Western Blot)證實。  由于HCV核心抗體出現(xiàn)較早,因此,最近美國第二代酶聯(lián)免疫試驗法(ELISA)檢測抗HCV。該試劑盒采用HCVC區(qū)編碼蛋白C-22-3和非結(jié)構(gòu)區(qū)NS3編碼蛋白C-33-3和C-100-3包被載體。用本法檢測抗HCV,其檢出率可提高25~30%,且檢出抗HDV的時間也可提早16~42天。

  HDV cDNA/聚合酶鏈反應(yīng)

  (HCV cDNA/Polymerase Chain Reaction,RTPCR)測定肝和血清中HCV RNA。

  本法是將HDV RNA逆轉(zhuǎn)錄為HCV DNA,選用高度保守的5′非編碼區(qū)引物擴增放大后作電泳觀察結(jié)果。本法較靈敏。由于肝和血清中HCV RNA出現(xiàn)較抗-HCV為早,一些HCV感染者抗HCV尚未陽轉(zhuǎn)時,其肝和血清中已可測到HDV RNA。HCV RNA陽性,說明病毒在體內(nèi)復制;HCV RNA陰轉(zhuǎn),說明病毒被清除。因此,RT-PCR可作為丙型肝炎的早期診斷和獻血員篩查的出現(xiàn)指標,也可作為丙型肝炎預(yù)后的一個指標。

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